Ide o optický mikroskop, v ktorom pri prenikaní svetla do nezafarbenej vzorky dochádza k malým svetelným odchýlkam alebo fázovým posunom. Tieto fázové posuny sa premietnu do obrazu, čo znamená, že keď svetlo prechádza cez nepriehľadnú vzorku, fázový posun rozjasní vzorku a vytvorí osvetlený (jasný) obraz na pozadí.
Mikroskopia s fázovým kontrastom vytvára vysoko kontrastné obrazy pri práci s priehľadnými vzorkami, takže to platí najmä pre snímky mikrobiálnych kultúr, fragmentov tenkých tkanív, bunkového tkaniva a subcelulárnych častíc.
Princíp fungovania mikroskopie s fázovým kontrastom spočíva v použití optických metód na premenu preparátu na amplitúdový obraz, ktorý je pozorovaný cez okuláre mikroskopu.
PCM možno použiť na zobrazenie nezafarbených buniek (známych aj ako fázové objekty), čo znamená, že morfológia buniek je zachovaná a bunky možno pozorovať v ich prirodzenom stave s vysokým kontrastom a efektívnou jasnosťou. Je to preto, že ak sú vzorky zafarbené a fixované, zabijú väčšinu buniek, čo je vlastnosť, ktorú svetelná mikroskopia vo svetlom poli nedokáže odstrániť.
Posuny, ku ktorým dochádza pri prenikaní svetla, sa premieňajú na zmeny amplitúdy, čo spôsobuje kontrast obrazu.
V kombinácii s prvkami zvyšujúcimi kontrast, ako je fluorescencia, umožňujú lepšiu prezentáciu snímok vzoriek.
Časti mikroskopu s fázovým kontrastom
Prístrojové vybavenie mikroskopu s fázovým kontrastom je založené na dráhe svetla od prijímania svetelného zdroja po vizualizáciu obrazu.
Preto jeho postupnosť pozostáva z:
Svetelný zdroj (ortuťová oblúková lampa)
skupinový výstrel
clona
kondenzátor
Kruhový kondenzátor
exemplár
Účel
fotografický tanier
polarizované svetlo
fázový krúžok
Vlastnosti mikroskopu s fázovým kontrastom
Zmena spôsobená vychýleným rozptýleným (odchýleným) svetlom a neodchýleným svetlom, ktoré dopadá na vzorku, kde je absorbované, sa vytvára pri určitej vlnovej dĺžke a vytvára farbu. Rozdiel spôsobený rozptýleným svetlom a absorbovaným svetlom sa nazýva zmena amplitúdy. Tieto zmeny amplitúdy sú citlivé, a preto ich nemožno zobraziť fotografickým zariadením, ako je mikroskopia s fázovým kontrastom, a preto sú viditeľné ľudským okom.
Kondenzátor mikroskopu s fázovým kontrastom má nepriehľadný disk nazývaný šiška, zatiaľ čo priehľadná šiška vytvára kužeľ svetla, ktorý prechádza vzorkou. Keď sa svetlo mení, časť svetla na vzorke je ohnutá v dôsledku zmien optickej hustoty a vytvára obraz na objektíve. Neodchýlené svetlo zasiahne fázové prstence na fázovej doske, zatiaľ čo vychýlené svetlo minie fázové prstence, ktoré prechádzajú priamo cez fázovú dosku, čím sa vytvorí obraz.
Mikroskopy s fázovým kontrastom sú navrhnuté s objektívmi, ktoré môžu vykonávať rôzne funkcie, keď sa používajú v spojení s technikami zvyšujúcimi kontrast, ako je fluorescencia. Objektív je umiestnený vo vnútornej fázovej doštičke, ktorá mení absorpciu svetla a fázový posun (tj nefraktovaný), čím vytvára široké spektrum na kontrast vzorky a vytvára silný kontrast v pozadí.
Aplikácie mikroskopie s fázovým kontrastom
Určte morfológiu živých buniek, ako sú živočíšne a rastlinné bunky
Študovať pohyblivosť a štruktúru pohybu mikroorganizmov
Detekcia určitých mikrobiálnych prvkov, ako sú bakteriálne endospóry
